Mature NGF/proNGF Combo (BEK-2213/2236), Mouse, Rapid ELISA - BEK-2225

Combo NGF/proNGF maduro (BEK-2213/2236),camundongo ensaio ELISA rápido

DESCRIÇÃO

O Kit de ensaio imunoenzimático (ELISA) Mouse Mature NGF/proNGF Combo RapidTM combina kits ELISA individuais, mas complementares, para as duas isoformas mais importantes de NGF: NGF maduro (BEK-2213) e proNGF completo (BEK-2236).

Ambos os kits são ELISAs sanduíche, úteis para a quantificação de NGF maduro e proNGF em menos de 4 horas em sobrenadantes de cultura celular e homogeneizados de tecido somente se usados conforme indicado, com protocolo simplificado e sem perda de sensibilidade ou especificidade. Os pesquisadores usaram ambos os kits para medição de NGF/proNGF na urina de camundongos, no entanto, a Biosensis ainda não validou internamente o uso de urina em ambos os kits de ELISA. Os usuários finais são fortemente aconselhados a realizar experimentos de validação essenciais para garantir a quantificação precisa de NGF/proNGF na urina de camundongos. Consulte os protocolos de kit mais atuais para BEK-2213 (Mature BDNF RapidTM ELISA) e BEK-2236 (proNGF RapidTM ELISA), para obter instruções de uso específicas para cada aplicação de substrato.

O kit Mature NGF ELISA consiste em um anticorpo de captura monoclonal anti-NGF de camundongo pré-revestido, um anticorpo anti-detecção de NGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). O kit proNGF ELISA consiste em um anticorpo de captura anti-proNGF pré-revestido, um anticorpo anti-detecção de NGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). A adição de um substrato (3,3',5,5'-tetrametilbenzidina, TMB) produz um produto de reação colorido que é diretamente proporcional à concentração de NGF maduro ou proNGF presente em amostras e padrões de proteínas. Um controle positivo de NGF e proNGF (amostra de CQ) é fornecido para garantir o desempenho consistente do ensaio.

O kit Mature NGF ELISA emprega uma proteína NGF nativa de camundongo como padrão, purificada das glândulas submaxilares de camundongos de acordo com os procedimentos publicados. O padrão calibrador reflete o estado nativo da proteína NGF de camundongo e foi escolhido para fornecer a quantificação mais precisa dos níveis naturais de proteína NGF em amostras de camundongos. O kit proNGF ELISA contém um padrão proNGF recombinante de camundongo expresso em E.coli. Observe que este kit Matur NGF/proNGF Combo é projetado para medir as formas de proteína de camundongo, embora devido à homologia de sequência, o kit Mature NGF ELISA detectará NGF maduro humano e de rato. O kit proNGF ELISA reage de forma cruzada com o proNGF de rato devido ao alto grau de homologia (96%) com o proNGF de camundongo baseado na sequência de aminoácidos, e a capacidade deste kit em detectar proNGF em lisados celulares PC12 de ratos e homogeneizado de tecido cerebral de ratos. No entanto, o ELISA proNGF mostra pouca reatividade cruzada (20%) com o proNGF humano.

Este kit Combo é capaz de distinguir e quantificar independentemente as isoformas NGF maduras e NGF de comprimento total. Dados de validação interna demonstram <0,1% de reatividade cruzada de proNGF de camundongo de comprimento total no ELISA NGF maduro quando ensaiado a 25 ng/mL em tampão de ensaio, e proNGF não é detectável quando ensaiado em toda a faixa de calibração de NGF maduro. Os anticorpos usados no kit proNGF ELISA ligam-se a epítopos dentro do domínio pró-domínio (captura) e domínio maduro (detecção) da proteína, portanto, o ensaio de ELISA proNGF não detecta o peptídeo pró-domínio. Nenhuma reatividade cruzada é observada no kit proNGF ELISA com NGF de camundongo maduro e proBDNF completo quando testado em tampão de ensaio.

Este kit ELISA não foi testado para outras aplicações. Ele foi configurado apenas para uso em pesquisa e não deve ser usado para procedimentos diagnósticos ou clínicos.
 

• Aplicação  ELISA
• Reatividade Camundongo
• Range Mature NGF: 3.9 – 250 pg/mL             proNGF: 0.156 – 10 ng/mL
• Sensibilidade O limite típico de detecção (LOD) para NGF maduro de camundongo é de 2 pg/mL determinado como 150% do valor do branco. O limite típico de detecção (LOD) para proNGF de camundongo é inferior a 50 pg/mL, determinado como valor em branco mais 3x desvio padrão de OD em branco (n=10).

Componentes do kit  O kit ELISA contém 2 placas de tiras pré-revestidas de 96 poços por kit (1 x anticorpo NGF, 1 x placa revestida com anticorpo proNGF), padrões de proteína, amostra de CQ, reagentes de detecção, bloqueador de anticorpos heterofílicos, tampões de lavagem e amostra, tampão de substrato e protocolos detalhados.

INFORMAÇÃO

O fator de crescimento nervoso (NGF) é sintetizado como um precursor (proNGF) que pode ser liberado e ter funções fisiológicas para causar morte celular. Ele se liga ao receptor de neurotrofina p75 e sortilina e também pode ser importante para o desenvolvimento do sistema nervoso. O proNGF é sintetizado nos tecidos-alvo e na glia, transportado retrogradamente e pode ser liberado.