Os reagentes de rastreamento exibem várias vantagens importantes:
· Altamente publicado em revistas de alto impacto - qualidade validada por seus pares
· Protocolos detalhados - reagentes fáceis de usar com garantia de funcionamento
· Excelente suporte técnico - garantindo que seus experimentos sejam bem-sucedidos
· Flexibilidade - compatível com vários tipos de tecido, técnicas de coloração e protocolos de imunocoloração de anticorpos existentes
Identificando neurônios em degeneração com Fluoro-Jade B e C
As causas e efeitos da degeneração neuronal são de grande interesse para uma ampla variedade de neurocientistas. Paralelamente a esse interesse, existe um número crescente de métodos aplicáveis à detecção de degeneração neuronal. Os reagentes de rastreamento Fluoro-Jade B (FJB) e C (FJC) mancham todos os neurônios em degeneração, independentemente do insulto específico ou do mecanismo de morte celular.
Primeiro: Coloração de Fluoro-Jade C (FJC) (verde) de neurônios em degeneração na região CA3 do hipocampo em ratos velhos diabéticos. Azul: coloração nuclear DAPI. Imagem cortesia do Dr. Wang e colegas (Wang S. et al. (2020).
Segundo: Dupla exposição usando iluminação combinada de epifluorescência azul e ultravioleta das camadas superficiais do córtex cingulado de rato exposto ao ácido caínico. A camada I contém Fluoro conspícuo -Terminais axônicos em degeneração positiva Jade C. A camada II contém células granulares viáveis DAPI positivas densamente compactadas. A camada III contém uma mistura de células piramidais degenerativas FJC positivas e células piramidais viáveis DAPI positivas. A foto é cortesia do Dr. Larry Schmued.
O FJC exibe a maior relação sinal/fundo, bem como a resolução mais alta. Isso se traduz em uma mancha de máximo contraste e afinidade para neurônios em degeneração, e o torna ideal para localizar não apenas corpos de células nervosas em degeneração, mas também dendritos distais, axônios e terminais. O corante é altamente resistente ao desbotamento e é compatível com praticamente todos os protocolos de coloração e processamento histológico.
O corante fluorescente Fluoro-Jade B (FJB), como seu irmão mais purificado FJC, é um derivado aniônico da fluoresceína útil para a coloração histológica de neurônios em degeneração. O FJB difere do FJC por ser uma formulação química um pouco menos refinada e, portanto, não fornece o mesmo nível de sinal-ruído ou alta resolução que o FJC. No entanto, o FJB ainda é amplamente utilizado e funciona muito bem como um marcador de neurônios em degeneração e até mesmo da glia (ver Damjanac M et al., 2007). FJB opera de forma quase idêntica em protocolo ao de FJC, e FJB é compatível com vários outros procedimentos de rotulagem, incluindo técnicas de Nissl imunofluorescentes e fluorescentes.
Os reagentes de rastreamento Fluoro-Jade B e C estão disponíveis nos seguintes tamanhos:
- TR-100-FJ, Fluoro-Jade C (FJC) Kit de coloração pronto para diluir (RTD) (40 mL)
- TR-100-FJT, kit de coloração Fluoro-Jade C (FJC) pronto para diluir (RTD), tamanho de teste (20 mL)
- TR-150-FJ, Fluoro-Jade B (FJB) em pó (30 mg)
- TR-160-FJ, Fluoro-Jade C (FJC) em pó (30 mg)
Nota: Fluoro-Jade B (FJB) Powder (TR-150-FJ) é equivalente ao produto descontinuado AG310 da Merck-Millipore. Fluoro-Jade C (FJC) Powder (TR-160-FJ) é equivalente ao produto descontinuado AG325 da Merck-Millipore.
Identificando a placa amiloide com Amylo-Glo e HQ-O
O reagente de coloração Amylo-Glo pronto para diluir (RTD) (TR-300-AG) é projetado para corar placas amilóides em seções de tecido. Este marcador tem várias vantagens sobre outros marcadores convencionais, como Thioflavin S e Congo Red, devido às suas propriedades químicas e espectrais únicas (Schmued L et al., 2012). O uso de Amylo-Glo resulta em uma coloração excitável UV azul muito brilhante sob condições fisiológicas que não vazará quando iluminada com outros filtros. Seu brilho o torna ideal para estudos de quantificação de baixa ampliação, enquanto seu perfil único de excitação/emissão e condições de coloração suaves o tornam ideal para combinação para múltiplos estudos de marcação por imunofluorescência. Amylo-Glo RTD é compatível com imunohistoquímica ou imunocitoquímica fresca, congelada e fixada em formalina, e é particularmente bom para rotulagem confocal e múltipla devido à sua alta intensidade fluorescente, alta resistência a fotobranqueamento e característica única de fluorescência de canal UV.
Primeiro: A exposição tripla permite a localização simultânea de placas amilóides positivas para Amylo-Glo (azul), astrócitos hipertrofiados positivos para GFAP (verde) e micróglia ativada (vermelho) no hipocampo do camundongo AD/Tg. Iluminação combinada de luz UV, azul e verde.
Segundo: Marcação Amylo-Glo de placas amilóides (azul) com contraste de Nissl (corpo celular) de brometo de etídio (vermelho) na região do giro denteado do hipocampo do camundongo AD/Tg.
O kit Amylo-Glo RTD Amyloid Plaque Stain Reagent with EtBr counter stain (TR-400-AG) utiliza um contraste de brometo de etídio para uma maneira rápida e eficaz de visualizar núcleos celulares e corpos celulares de células, sob iluminação UV, permitindo a avaliação de placas amilóides e posicionamento de células/tecidos em uma única etapa.
O Reagente de Rastreamento HQ-O Ready-To-Dilute (RTD) foi desenvolvido para marcar placas amilóides em seções de tecido congeladas embebidas em parafina ou cortadas recentemente. Como um quelante de zinco fluorescente, o HQ-O é único, pois aproveita a presença conhecida de zinco concentrado em placas amilóides. Estudos com HQ-O revelaram que estruturas semelhantes a placas fluorescentes são vistas apenas quando o Aβx-42 sintético é agregado na presença de zinco. Sob excitação de luz azul, as estruturas da placa aparecem fluorescentes em verde brilhante no parênquima cerebral, correlacionando-se estreitamente com as estruturas da placa observadas após a coloração do anticorpo Aβ. O reagente de coloração HQ-O RTD é compatível com outros fluoróforos, como DAPI, Hoechst e brometo de etídio, bem como anticorpos marcados com fluorescência com espectros de emissão na faixa de emissão azul e/ou vermelha dos microscópios fluorescentes. Devido às suas características de quelação de zinco, o reagente de coloração HQ-O RTDTM pode visualizar estruturas globulares dentro dos vasos sanguíneos e leucócitos intravasculares.
O reagente de coloração HQ-O RTD tem várias vantagens sobre os corantes excitantes de luz azul mais antigos, como a Tioflavina S:
· O HQ-O liga-se às fibrilas e placas amiloides independentemente da confirmação por meio de propriedades únicas de ligação ao zinco
· Exibe maior contraste e resolução em comparação com Tioflavina S, Tioflavina T e Vermelho Congo
· Tem espectros de excitação e emissão estreitos, sem vazamento de excitação, permitindo facilmente estudos de rotulagem múltiplos nítidos
· Usa filtros comuns de luz azul (fluorescência FITC) (Emax 475 nm)
· É compatível com FFPE e seções de tecido congelado
· É FÁCIL, MAIS NÍTIDO E MAIS BRILHANTE do que qualquer outro corante amilóide não UV!
Os reagentes de rastreamento de placa amilóide estão disponíveis nos seguintes tamanhos:
TR-300-AG, Amylo-Glo RTD Amyloid Plaque Stain Reagent (5 mL)
TR-400-AG, Amylo-Glo RTD Amyloid Plaque Stain Reagent with EtBr counter stain (5 mL)
TR-700-HQO, HQ-O RTD Amyloid Plaque Stain Reagent (40 mL)
Identificando Mielina Normal e Patogênica com Black-Gold II
Black-Gold II é um complexo haloaurofosfato que localiza a mielina no sistema nervoso central. O Black Gold II Ready-to-Dilute (RTD) Staining Kit permite localizar a mielina, tanto as fibras individuais como os tratos, juntamente com a opção de co-localizar os corpos celulares através da contra-coloração de azul de toluidina. As fibras mielinizadas marcadas com Black Gold II aparecem quase pretas, enquanto os corpos de Nissl celulares marcados com Toluidine Blue O são azuis sob iluminação de campo brilhante.
O Black Gold II pode demonstrar e caracterizar alterações específicas da mielina associadas à exposição a diversos neurotóxicos, incluindo ácido caínico, ácido domóico, ácido 3-nitropropiônico, Fluoro-Gold e isoniazida. O Black Gold II também pode ser combinado com outros marcadores histoquímicos, incluindo manchas de Nissl, marcadores fluorescentes transportados retrogradamente e marcadores fluorescentes de degeneração neuronal. As vantagens associadas ao Black-Gold II incluem alta resolução, alto contraste, tempo de processamento histoquímico curto, versatilidade e reprodutibilidade consistente.
Primeiro: Iluminação de campo claro (60X) do hipocampo de camundongo Ad-Tg de 8 meses de idade. A patologia da mielina pode ser observada dentro e ao redor das placas amilóides. Os corpos celulares dos grânulos adjacentes e das células polimórficas aparecem em azul, enquanto as fibras mielizadas individuais aparecem quase pretas. A foto é cortesia do Dr. L. Schmued.
Segundo: Imunorreatividade semelhante ao peptídeo relacionado ao gene da calcitonina Locus K do cérebro humano (preto) e coloração de mielina (vermelho, kit de coloração Black-Gold II, Biosensis) na medula oblonga, mostrando a organização neuroquímica e estrutural semelhante dos núcleos da coluna dorsal Locus K e a substância gelatinosa trigeminal espinhal (Del Fiacco M. et al., 2018).
Biosensis Normal & Pathogenic Myelin Tracing Reagent está disponível no seguinte tamanho:
TR-100-BG, Black-Gold II Kit de coloração de mielina pronto para diluir com azul de toluidina O Counter Stain para identificar mielina normal e patogênica (10 mL)
