Ensaios de imuno-PCR

O que é um ensaio de imuno-PCR?

O IQELISA e o NexaTag™ qIPCR ELISA são ensaios de imuno-PCR que combinam a especificidade e a facilidade de uso de um ELISA com a sensibilidade da PCR em tempo real (RT-PCR, também conhecida como PCR quantitativa ou qPCR), fornecendo uma plataforma de detecção que usa fluxos de trabalho ELISA familiares ao mesmo tempo em que expande as fronteiras dos seus limites de detecção e requisitos de volume de amostra.

Os benefícios de um kit de imuno-PCR em relação a um ELISA padrão incluem:

• Sensibilidade até 1000 vezes maior — Assim como em todos os ELISAs, a sensibilidade do ensaio depende da sensibilidade dos anticorpos utilizados. No entanto, os limites mínimos de quantificação (LLOQs) do IQELISA são, em média, 23 vezes menores do que os do ELISA padrão com o mesmo par antígeno-anticorpo, podendo ser até 1000 vezes menores para o NexaTag™ qIPCR.

• Requisitos de volume de amostra tão baixos quanto 10 µL — Em comparação com um ELISA padrão, os kits de imuno-PCR exigem 1/10 do volume da amostra, garantindo a detecção quantitativa mesmo quando a amostra é limitante.

 

NexaTag™ qIPCR ELISA

1. O RayBio ® NexaTag™ qIPCR ELISA contém esferas pré-revestidas com anticorpos de detecção específicos.
2. Para começar, misture as esferas conjugadas ao anticorpo com o anticorpo oligoconjugado e pipete nos poços.
3. Pipete os padrões e as amostras nos poços. A proteína-alvo nos padrões e nas amostras se ligará tanto ao anticorpo imobilizado na esfera quanto ao anticorpo oligoconjugado, formando um complexo sanduíche.
4. Lave os poços e adicione tampão de eluição para eluir o complexo e transfira para uma placa de PCR de 96 poços.
5. Por fim, coloque a placa em um instrumento de qPCR para ciclagem e medição da amplificação do DNA. O número de ciclos em que a amplificação é detectada é proporcional à quantidade de anticorpo oligoconjugado ligado ao antígeno em cada poço.

 

IQELISA

1. As placas de PCR RayBio ® IQELISA de 96 poços são pré-revestidas com anticorpos de captura específicos.
2. Para começar, pipete os padrões e as amostras nos poços. A proteína-alvo nos padrões e nas amostras se ligará ao anticorpo imobilizado.
3. Lave os poços e adicione o reagente de afinidade de detecção que se ligará a qualquer antígeno capturado.
4. Por fim, coloque a placa em um instrumento de qPCR para ciclagem e medição da amplificação do DNA. O número de ciclos em que a amplificação é detectada é proporcional à quantidade de reagente de detecção de afinidade ligado ao antígeno capturado em cada poço.

 

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