Kit NexaTag IP-10 (CXCL10) Humano - ELISA qIPCR - BIQH-IP10-1

Introdução

O ELISA de imuno-PCR quantitativo RayBio® NexaTag  ™ (anteriormente conhecido como BIQ-ELISA) é um método inovador de detecção de proteínas que combina a especificidade do ELISA em sanduíche, a sensibilidade da PCR em tempo real e a facilidade de manipulação de microesferas magnéticas. Neste sistema, o anticorpo de captura (CAB) é marcado com biotina e pré-absorvido em esferas revestidas com estreptavidina (CAB-Biotina-SA-Beads), enquanto o anticorpo de detecção (DAB) é conjugado com um código de barras exclusivo de ácido oligonucleotídico (ONA) para amplificação do sinal (DAB-ONA).

O procedimento é simples e leva um total de quatro horas para concluir o ensaio. Parte 1: Formação e purificação do imunocomplexo (ONA-DAB-Antígeno-CAB-Biotina-SA-Beads). As amostras são incubadas com DAB-ONA e CAB-Biotina-SA-Beads em uma placa de 96 poços fornecida. Na presença da proteína alvo, o DAB ONA liga-se ao alvo e se liga ao CAB-Biotina-SA-Beads por meio da interação biotina-estreptavidina, e as proteínas não ligadas são removidas por meio de lavagem com lavadora magnética automática. Parte 2: Amplificação por PCR. O imunocomplexo ligado será liberado das esferas e transferido como molde para qPCR. Primers e master mix de PCR são adicionados aos poços e os dados serão coletados usando qPCR. Os valores de Ct obtidos a partir do qPCR são então usados para calcular a quantidade de antígeno contida em cada amostra, onde valores de Ct mais baixos indicam uma concentração maior de antígeno. Em um experimento real, um conjunto de padrões de proteínas alvo com concentrações conhecidas será executado simultaneamente para gerar uma curva padrão para quantificar amostras desconhecidas.

A tecnologia RayBio® NexaTag ™ qIPCR ELISA representa um avanço significativo em ensaios de detecção de proteínas, fornecendo um método ultrassensível e altamente específico para quantificar proteínas em amostras biológicas. A capacidade dessa tecnologia de combinar múltiplas vantagens dos métodos existentes em uma plataforma única e fácil de usar a torna uma ferramenta poderosa para a comunidade de pesquisa. Os kits RayBio NexaTag™ qIPCR ELISA podem ser usados para a medição quantitativa de proteínas em vários tipos de amostras, incluindo soro, plasma e sobrenadantes de cultura de células, com sensibilidade de detecção de femtogramas por mililitro.

Características do produto

• Ultrassensibilidade: até 1.000x mais sensível que o ELISA tradicional
• Volume de amostra ultrabaixo: menos de 10 µL necessários
• Especificidade: Detecção baseada em sanduíche
• Simplicidade: Processamento em duas etapas
• Eficiência: Obtenha dados em 4 horas
• Pronto para Multiplexing*

• Instrumento de PCR em tempo real, Bio-Rad ou QuantStudio™ recomendado
• Agitador de placas orbital de 96 poços (com capacidade de atingir 700 rpm)
• Lavadora de microplacas (recomenda-se a lavadora BioTek 405 TS) e um suporte magnético compatível para placas de fundo em V de 96 poços (recomenda-se a ThermoFisher AM10050)
• Pipetas de precisão para fornecer volumes de 1 μL a 1 mL
• Ponteiras de pipeta (ponteiras de barreira são recomendadas para reduzir a contaminação)
• Pipetas ajustáveis de 1-25 mL para preparação de reagentes
• Centrífuga que pode centrifugar placas de 96 poços a 500 g
• Água sem nuclease ou água deionizada
• Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL, 2 mL ou 5 mL