Combo NGF/proNGF maduro (BEK-2214/2236), rato, ensaio ELISA rápido.
DESCRIÇÃO
O Kit Biosensis Rat Mature NGF/proNGF Combo RapidTM enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) combina kits de ELISA individuais, mas complementares, para as duas isoformas mais importantes de NGF: NGF maduro (BEK-2214) e proNGF completo (BEK-2236).
Ambos os kits são ELISAs sanduíche, úteis para a quantificação de NGF maduro e proNGF em menos de 4 horas em sobrenadantes de cultura celular e homogeneizados de tecido somente se usados conforme indicado, com protocolo simplificado e sem perda de sensibilidade ou especificidade. Consulte os protocolos de kit mais atuais para BEK-2214 (Mature BDNF RapidTM ELISA) e BEK-2236 (proNGF RapidTM ELISA), para obter instruções de uso específicas para cada aplicação
O kit Mature NGF ELISA consiste em um anticorpo de captura monoclonal anti-NGF de camundongo pré-revestido, um anticorpo anti-detecção de NGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). O kit proNGF ELISA consiste em um anticorpo de captura anti-proNGF pré-revestido, um anticorpo anti-detecção de NGF biotinilado e estreptavidina conjugada com horseradish peroxidase (HRP). A adição de um substrato (3,3',5,5'-tetrametilbenzidina, TMB) produz um produto de reação colorido que é diretamente proporcional à concentração de NGF maduro ou proNGF presente em amostras e padrões de proteínas. Um controle positivo de NGF e proNGF (amostra de CQ) é fornecido para garantir o desempenho consistente do ensaio..
O kit Mature NGF ELISA emprega uma proteína NGF de rato recombinante de alta qualidade como padrão e, portanto, o kit Mature NGF/proNGF Combo é projetado para medir as isoformas de NGF de rato. No entanto, o kit de ELISA NGF maduro de rato reagirá de forma cruzada com a proteína NGF madura de camundongo e humano. O kit proNGF ELISA contém um padrão proNGF recombinante de camundongo expresso em E.coli. ProNGF de camundongo e proNGF de rato compartilham 96% de homologia de sequência, e dados de validação interna demonstraram a capacidade do proNGF ELISA de detectar proNGF em lisados de células PC12 de ratos e homogeneizado de tecido cerebral de ratos. No entanto, o ELISA proNGF mostra pouca reatividade cruzada (20%) com o proNGF humano.
Este kit Combo é capaz de distinguir e quantificar independentemente as isoformas NGF maduras e NGF de comprimento total. Dados de validação interna demonstram que os anticorpos maduros do ensaio de ELISA NGF detectam preferencialmente a forma madura de NGF. A reação cruzada de proNGF total foi < 0,1% quando ensaiada a 25 ng/mL em tampão de ensaio, e não detectável quando ensaiada na faixa de calibração de NGF maduro. Os anticorpos usados no kit proNGF ELISA ligam-se a epítopos dentro do domínio pró-domínio (captura) e domínio maduro (detecção) da proteína, portanto, o ensaio de ELISA proNGF não detecta o peptídeo pró-domínio. Nenhuma reatividade cruzada é observada no kit proNGF ELISA com NGF de camundongo maduro e proBDNF completo quando testado em tampão de ensaio.
Este kit ELISA não foi testado para outras aplicações. Ele foi configurado apenas para uso em pesquisa e não deve ser usado para procedimentos diagnósticos ou clínicos.
Componentes do kit O kit ELISA contém 2 placas de tiras pré-revestidas de 96 poços por kit (1 x anticorpo NGF, 1 x placa revestida com anticorpo proNGF), padrões de proteína, amostra de CQ, reagentes de detecção, bloqueador de anticorpos heterofílicos, tampões de lavagem e amostra, tampão de substrato e protocolos detalhados.
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