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Kit de ensaio fluorométrico do poro de transição de permeabilidade mitocondrial (mPTP) - E-BC-F064

As mitocôndrias são os centros de energia das células e desempenham um papel muito importante nos processos de apoptose e morte celular necrótica. O poro de transição de permeabilidade mitocondrial (mPTP), também conhecido como megacanal mitocondrial (MMC), é um canal não específico composto pelas membranas interna e externa das mitocôndrias, que participa da liberação de substâncias dentro das mitocôndrias durante a morte celular. A abertura dos poros de transição de permeabilidade mitocondrial é um evento-chave que causa a morte celular e desempenha um papel importante na regulação da sobrevivência celular e da apoptose.
 

Princípio de detecção deste kit:
O kit utiliza Calceína AM para corar as células, fazendo com que o citoplasma, incluindo as mitocôndrias, apresente forte fluorescência verde. Em condições fisiológicas de pH, quando a Calceína se complexa com Co²⁺, o sinal de fluorescência é extinto. Normalmente, o mPTP nas mitocôndrias está fechado e, nesse momento, o Co²⁺ não consegue entrar nas mitocôndrias, resultando apenas em fluorescência verde dentro delas. A membrana interna mitocondrial de células normais pode manter um gradiente de potencial mitocondrial normal para garantir a respiração celular e o fornecimento de energia. Com a entrada e liberação de Ca²⁺, um poro de permeabilidade de baixa condutividade alterna entre aberto e fechado.

Quando as células passam por apoptose e morte patológica, a permeabilidade dos poros de transição de potencial da membrana mitocondrial muda. A sobrecarga de Ca²⁺, a oxidação da glutationa mitocondrial, o aumento nos níveis de espécies reativas de oxigênio, incluindo a subsequente liberação de citocromo C, e a diminuição do potencial da membrana mitocondrial podem levar à ativação dos poros de transição de permeabilidade mitocondrial.

O tratamento adicional com o carreador de íons cálcio Ionomicina, como controle, induz uma grande quantidade de Ca²⁺ extracelular a entrar na matriz intracelular e mitocondrial, causando a abertura do mPTP, o que enfraquece ou elimina a fluorescência verde nas mitocôndrias. Dessa forma, o grau de abertura do mPTP mitocondrial pode ser julgado com base na intensidade da fluorescência verde da Calceína nas mitocôndrias. Quanto mais forte a fluorescência verde, menor o grau de abertura; quanto mais fraca a fluorescência verde, maior o grau de abertura.
 

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